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　　光催化材料是一類在特定波長光線照射下，自身不發(fā)生永久性消耗，卻能通過光生載流子的產(chǎn)生與遷移，催化周圍化學(xué)反應(yīng)的功能性材料。光催化材料的抗病毒活性，是指其在光照射下，通過上述光催化反應(yīng)產(chǎn)生的活性氧物種，破壞病毒結(jié)構(gòu)、抑制病毒復(fù)制，最終實現(xiàn)病毒失活的能力。光催化材料抗病毒活性檢測有哪些方法步驟？

　　光催化材料抗病毒活性檢測方法步驟

　　1.樣品準(zhǔn)備階段

　　制備光催化材料樣品：將光催化材料制成標(biāo)準(zhǔn)尺寸的試件，或制備光催化涂層；

　　樣品預(yù)處理：用無菌水或磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗樣品表面，去除雜質(zhì)，然后在無菌環(huán)境中干燥，確保樣品表面無微生物污染；

　　病毒懸液制備：在細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)目標(biāo)病毒，待病毒增殖至對數(shù)期后，用細胞維持液稀釋病毒，制備成濃度為10?~10?PFU/mL的病毒懸液，備用。

　　2.病毒接種與孵育

　　取0.1mL病毒懸液均勻滴加在光催化材料樣品表面，用無菌蓋玻片輕輕覆蓋，使病毒懸液與樣品表面充分接觸（避免懸液干燥）；

　　設(shè)置對照組：①空白對照組（無材料，僅病毒懸液）；②無光對照組（光催化材料+病毒懸液，但置于黑暗環(huán)境，排除材料本身的物理吸附作用）；③陽性對照組。

　　將所有樣品（含對照組）置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中孵育1小時，使病毒充分吸附。

　　3.光催化作用階段

　　按照實驗設(shè)計的光源條件，對光催化材料樣品進行光照處理，光照時間根據(jù)材料性能設(shè)定（通常為0.5~4小時）；

　　無光對照組需全程避光，其他條件與光催化組一致。

　　4.病毒滴度測定（空斑實驗法）

　　光照結(jié)束后，向每個樣品表面加入1mL含1%胎牛血清的PBS，用移液器反復(fù)吹吸，洗脫殘留的病毒，收集洗脫液；

　　將洗脫液進行10倍梯度稀釋（從10?到10??），取每個稀釋度的洗脫液0.1mL，分別接種至已長滿單層宿主細胞（如MDCK細胞用于流感病毒，Vero細胞用于SARS-CoV-2）的培養(yǎng)皿中；

　　孵育1小時后，向培養(yǎng)皿中加入含1%瓊脂糖的細胞維持液，覆蓋細胞表面，防止病毒擴散；

　　繼續(xù)培養(yǎng)3~7天（根據(jù)病毒增殖周期調(diào)整），待空斑（病毒感染細胞后形成的透明區(qū)域）形成后，用結(jié)晶紫染色，計數(shù)每個培養(yǎng)皿中的空斑數(shù)量，計算病毒滴度（PFU/mL）。

　　5.結(jié)果計算與判定

　　抗病毒活性用病毒滅活率表示，計算公式為：

　　病毒滅活率（%）=[1-（光催化組病毒滴度/無光對照組病毒滴度）]×100%

　　判定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求，當(dāng)病毒滅活率≥99%（即log??降低值≥2）時，可判定該光催化材料具有顯著的抗病毒活性；若滅活率≥99.9%（log??降低值≥3），則為高效抗病毒材料。